組織細胞培養(yǎng)技術研究的對象不一般,它是具有完整生命力的生物單位,因此與其他一般實驗工作不同,要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。本文將主要針對細胞培養(yǎng)實驗室,講解建設使用注意事項。
一、基礎建設方案之墻頂地
(1)墻體
廢物暫存間、強電間、水處理間可采用乳膠漆墻面,其他實驗室區(qū)域采用玻鎂板墻體。玻鎂板是氧化鎂、氯化鎂、和水三元體系,具有防火防水、無味無du、高強質輕、施工方便、使用壽命長等特點。
(2)天花
防火等級達到A級:天花選用彩鋼板。實用美觀,且易清潔消毒、光滑防水。
防火等級達到B1級:天花選用鋁扣板。可大幅度降低通風和機電施工及維修的難度和強度,也利于日后的正常維護和檢修。
(3)地面
地面材料的選擇通常要求抗靜電、抗菌耐磨、耐腐蝕、防火、防塵、降噪音等,色澤選擇和墻體統(tǒng)一或相似的2.2mm厚進口品牌PVC卷材,防火等級為B級以上。
二、細胞實驗室的設計分區(qū)
細胞培養(yǎng)實驗室應能進行六方面的工作:
無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
無菌操作區(qū)——
理想的無菌操作室應劃為三部分:
●geng衣室:供geng換衣服、鞋子及穿戴帽子和kou罩。
●緩沖間:位于geng衣間與操作間之間。
目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境,同時可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
●無菌操作間:于無菌操作、細胞培養(yǎng)。
大小要適當,且其頂部不宜過高(不超過2.5m),以保證紫外線的有效滅菌效果;
墻壁光滑*以便清潔和消毒;
工作臺安置不應靠墻壁,臺面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
孵育區(qū)——本區(qū)對無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴格,但仍需清潔無塵,因此也應設置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行,后者費用高,一般實驗室多采用孵箱進行工作。
儲藏區(qū)——主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,環(huán)境需要清潔無塵。
制備區(qū)——主要進行培養(yǎng)液及有關培養(yǎng)用的液體等的制備。
清洗和消毒滅菌區(qū)——清潔和消毒滅菌區(qū)應與其他區(qū)域分開,主要進行所有細胞培養(yǎng)器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。
三、保衛(wèi)細胞,橫掃污染源的7大戰(zhàn)場
2008年8月,《The Scientist》期刊發(fā)表了一篇題為 A case of mistaken identity 的文章,文中指出現已發(fā)表的 650 多項研究中所用的ru腺癌細胞可能并不是真正的ru腺癌細胞。
對于細胞培養(yǎng)實驗室來說,杜絕一切可能的污染源至關重要。
①細胞房入口:和緩沖間相連,緩沖間內備消毒服裝和鞋,kou罩等,入內換上。進入后經過洗手-消毒—戴手套-再消毒。
②水浴鍋:對其進行定期消毒,也可以向水浴中加入適量的殺菌劑來抑制各種細菌、真菌的滋長。zuihao用恒溫孵育器代替水浴鍋,確保溫控精que性和均一性的同時也減少了污染的概率。
③顯微鏡:敞口放置培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶。防止造成溶液飛濺,或觀察時污染物鏡,并進一步造成交叉污染。
④CO2 培養(yǎng)箱:對于日常使用來說,至少每月清潔培養(yǎng)箱一次。盡量減少門打開次數,避免對溫度、培養(yǎng)基中 pH 值調節(jié)的影響。
另外要特別注意,CO2培養(yǎng)箱不能直接放在地板上。
⑤生物安全柜:在開始實驗前,必須對超凈臺進行全面消毒,正確的做法是對整個機柜表面進行擦拭。還有一件事*,那就是事先打開安全柜通風系統(tǒng),流通空氣,直到原有的內部濁氣都被排出。
⑥離心機:和顯微鏡一樣,離心機也是交叉污染的重災qu。平日里應保持離心機蓋關閉,拒污染于千里之外。離心機內部的小縫隙是藏污納垢之處,定期清潔轉子和腔室至關重要。
⑦窗戶 :細胞房通常沒有窗戶,如果有窗,那么無論什么時段,窗戶都不允許打開。同時拉上窗簾,做好請勿開啟的警示標記。
四、珍愛生命,看好那個“液氮罐”
1992年,一艘日本放在凍存船的液氮罐外膽破裂,導致原有的罐內9.3bar的正常壓力,瞬間變成了68.7bar。接著整條船炸了,方圓400米內的車和房子全部損毀,船被炸出了350米。
另外,液氮罐的作死方式不光是爆炸,還能很溫和。
那是爆炸的8年后,在愛丁堡的MRC西城醫(yī)院凍存細胞的實驗人員詹姆斯,由于液氮蓋子沒關導致的泄露,zui終窒息死亡。
這并不是個例,類似的事故時有發(fā)生。因此工作人員在進行實驗室相關操作的時候,一定要實時控制好液氮柜。這既是對自己生命的負責,也是對他人生命的尊重。
五、找專業(yè)人,做專業(yè)事
建設一座功能完善的實驗室,要由專業(yè)的人員進行專業(yè)設計,要全面綜合考慮,遵循以人為本的原則,建成正規(guī)化、標準化的實驗室達到zuijia的使用效果。