做細胞培養實驗經常會對血清凍融,怎么才能有效正確的利用血清也有對應的方法,今天分析如何融化血清讓實驗更好的完成。
與4℃過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢?重點有二!
其一:關系到沉淀出現的幾率!
記得嗎?血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區別,你懂得!)試想,如果采用4℃過夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大約需要10小時左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產生沉淀的重要原因之一。
采用三步法,只要2.5個小時,溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節約了時間,而且大限度減少了血清沉淀出現的幾率。
血清融化過程中,蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白
其二:血清在培養細胞中,重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細胞復蘇時,要保持細胞的活性,我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個半小時,4℃過夜需要大約10個小時(冰箱一般設2-8℃,所以各實驗室融化時間會稍有出入)。哪個速度對保留活性更好?不言而喻!