血清、血漿、尿液、唾液和細(xì)胞的收集和處理方法:
1.血清:用無(wú)菌管收集,室溫血液天然凝聚10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)堆積,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無(wú)菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
4.唾液:用無(wú)菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
1.培育的細(xì)胞
A、動(dòng)物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度到達(dá)100萬(wàn)/ml左右。經(jīng)過(guò)重復(fù)凍融(假如重復(fù)凍融,破碎效果欠好,就選用超聲波破碎),以使細(xì)胞損壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度到達(dá)100萬(wàn)/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方法,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞損壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
2.組織的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱取1g組織,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗刷堆積的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。
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