質譜技術(Mass Spectrometry,MS)具有靈敏度、準確度、自動化程度高的特點,能準確測量肽和蛋白質的相對分子質量、氨基酸序列及翻譯后修飾,開啟了大規模自動化的蛋白質鑒定之門。而以質譜技術為基礎的定量蛋白質,是當前研究重大疾病致病機理及藥理控制機制的必要手段。目前,定量蛋白質組學研究技術主要包括以質譜檢測為核心的穩定同位素化學標記(iChemistry™方案)、體內代謝標記(SILAC技術)和AQUA多肽技術,遠慕生物不斷完善解決方案,旨在幫助客戶解決定量蛋白質組學研究的難題。
行業標準iTRAQ試劑 — 同時分析8種樣品
多樣品同時分析使得劑量分析、時間水平上的動態監測、生物標志物研究和目標蛋白質的定量等重要研究成為可能。iTRAQ技術作為一種新穎且方便的蛋白質組學定量研究技術,已經在疾病標志物的尋找和不同時段或者不同狀態的多樣本定量分析等蛋白質組學研究領域得到了很好的應用。
iTRAQ試劑盒包括4種(114、115、116和117)或八種(113、114、115、116、117、118、119和121)相同質量的胺活性試劑,能對蛋白質水解的肽段進行標記,然后用質譜技術對這些多肽進行定量分析。這種簡單的基于肽段的iTRAQ®工作流程突破了很多局限性,可應用于蛋白質定量方面的全面研究,包括蛋白質翻譯后修飾的定量、親和純化樣品所得蛋白質和膜蛋白的定性定量。
技術特點:
1、實現對多組樣品的同時定性和定量分析
2、使蛋白質/蛋白質組分析的覆蓋度大化
3、增加了數據的可靠性和相關性:可對多達8個樣品同時進行定量分析
高標記率SILAC技術 — 體內氨基酸代謝標記
SILAC技術利用標記的氨基酸在細胞培養過程中對蛋白進行標記,常用于比較蛋白質組學、蛋白質與蛋白質相互作用、蛋白質與DNA相互作用、蛋白質與RNA相互作用等領域。Sigma-Aldrich公司提供99%豐度的標記氨基酸和不*培養基,可達到大化標記和替代,提高整體的量化精度。
SILAC技術原理十分簡單:兩組細胞同時培養,A組添加的是正常的“輕型”氨基酸,B組含有穩定同位素標記的“重型”氨基酸,細胞傳達若干代后,穩定同位素標記的氨基酸*摻入到蛋白質中,取代了原有的氨基酸。將兩組細胞混合后提取蛋白,通過質譜鑒定可出現兩段峰值,低分子量的肽段含輕型氨基酸,來源于A組,高分子量的肽段含重型氨基酸,來源于B組。如果SILAC肽段對呈現1:1的比例,則兩組樣品中此蛋白的豐度無異,反之則有差異。
技術特點:
1、體內標記,樣品處理等帶來的定量偏差較小,結果更精確
2、標記效率高,且不同蛋白的標記效率沒有差異
3、靈敏度高,蛋白質需要量少
4、高通量,可同時鑒定并定量數百至數千種蛋白質
5、線性定量范圍廣
合成AQUA多肽 — 生物標記物定量的終ji方法
AQUA多肽技術將同位素標記的多肽分子作為內標,利用質譜技術更精確地進行生物標志物定量、特異氨基酸修飾分析等。AQUATM肽段都經過嚴格的測試,保證其達到高純(HPLC)、精確原子量(ESI-MS)及其多肽特異性,以滿足對蛋白標記物進行精確高效的質譜定量。
AQUA肽段是根據目標多肽合成的胰蛋白酶肽,每個AQUA肽包含一個穩定同位素標記的氨基酸,分子量增加6-10道爾頓,與內源肽混合后通過質譜分析,已知含量的AQUA肽作為內標可以對內源肽進行精確定量。
技術特點:
1、更專注于重要蛋白標記物的分析
2、準確定量低豐度蛋白,測定位點特異性的磷酸化等修飾
3、技術流程簡單易操作,無需昂貴、耗時的同位素標記過程