洗刷這是試驗(yàn)操作過程中看似很簡單但又至關(guān)重要的一個(gè)過程，所以今天結(jié)合技術(shù)人員的建議和輔導(dǎo)來給你們遍及一下這方面小常識(shí)。
生物試劑的洗刷辦法
1. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔參加洗刷液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗刷液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不行觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
生物試劑試驗(yàn)開端前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量防止起泡。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、規(guī)范孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加規(guī)范品或待測樣品100μl，留意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證試驗(yàn)結(jié)果有效性，每次試驗(yàn)請運(yùn)用新的規(guī)范品溶液。
2.棄去液體，甩干，每個(gè)孔中參加Detection Ab工作液 100μl(在運(yùn)用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，辦法同過程3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(依據(jù)實(shí)際顯況酌情縮短或延長，但不行超過30分鐘。當(dāng)規(guī)范孔出現(xiàn)顯著梯度時(shí)，即可停止)。
7.每孔加停止液50μl，停止反響，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。停止液的參加次序應(yīng)盡量與底物液的參加次序相同。
8.生物試劑立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前翻開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
9.試驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期完畢。