抗體是生物學科研工作中有力的東西,沒有之一。這些“制導武器”,會在研究中自動尋覓并結合研究者感興趣的目標,并可經過各種示蹤技能將目標展現出來。正是因為抗體的專一特性,研究者或許會依賴于示蹤試驗所顯示的成果對所研靶標給出定性或定量的判斷。也正因此,毫無疑問的,專一性或特異性是抗體zui受科研工作者重視的特性。那么,抗體特異性首要由什么決定?為什么常聽到多抗特異性不如單抗的說法?在試驗中,是該挑選單抗仍是多抗?
下面咱們將就抗體的生產制備進程剖析抗體特異性差異的原因。
咱們不“生產”抗體,咱們只是大自然的“挑選”工抗體的制備,無論是單抗仍是多抗,其前期的動物免疫進程是*相同的,差異僅僅在挑選?;蛘哒f,單抗是在多抗制備的基礎上,進一步挑選并安穩表達特異單克隆細胞株的成果。當抗原免疫動物后,在淋巴結和脾等淋巴器官內經過一系列抗原處理和遞呈,促進B淋巴漿母細胞(Plasmablasts, PBs)分解老練,在轉錄水平成為排泄特異抗體的B淋巴漿細胞(Plasma cells, PCs),很多不同的漿細胞會排泄不同的針對抗原的抗體。由此,可以說每一個B漿細胞都成為一株單克隆抗體的候選者。
傳統的單克隆抗體制備便是經過將小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞系交融,挑選可以排泄特異抗體并安穩傳代的交融細胞株而實現的。而多克隆抗體(多抗)的制備便是從血清中分離純化一切的未經挑選的單克隆抗體。從以上進程可以看出,無論是單抗仍是多抗制備辦法,其針對靶點(抗原)的特異性抗體的發作首要源于被免疫動物本身的漿細胞分解老練,抗體生產者(人)其實并沒有做什么。
不同在于,多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的調集,它們有的特異性高,有的特異性低,總體特異性符合正態分布曲線的方式(如Fig1),而其特異性的總體表現也應處于統計學正態曲線中位線(MID)的水平。而單抗制備后續的挑選進程,可去除大部分的非特異抗體,保存幾株特異性較好的單克隆抗體。
然而,單抗制備進程中的細胞交融是一個隨機發作的進程,動物脾臟內的各種細胞如內皮、平滑肌、巨噬、NK、T、還有紅細胞、血小板等都或許與骨髓瘤細胞系發作交融。盡管B細胞是脾臟內首要的淋巴細胞,但可以排泄特異性抗體的老練漿細胞占脾細胞的比例很低,加之促細胞交融試劑如PEG等的細胞毒性,使得終成功交融形成安穩表達特異性抗體的雜交瘤細胞系的功率極低,大約為10-6。因此,在單抗制備進程中,大部分排泄特異性抗體的B細胞或許都被丟失了。終獲得的單克隆抗體其親和力和特異性或許都不是本次免疫中的。