在這溫暖的時光里,遠慕與您一同暢談血清實驗的基本原則。
1、解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
2、 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
4、 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
5、 在進行傳代培養(yǎng)時,我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代,不進行活性檢測,您可能接種比您認為的低的多的濃度的細胞,這常常可能導(dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。
6、 貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液只能使用一周。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會變得不穩(wěn)定。
血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟,并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反,對大部分細胞而言,GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因為加熱可能使血清中的沉淀增加,使您誤以為污染。