感受態DH細菌細胞轉化方法有哪些嗎?
點擊次數:1080 更新時間:2018-08-28
DH的感受態是指細胞經過一些特殊方法(電擊法、CaCl2法等處理后,細胞膜的通透性發生了暫時性的改變,成為能允許外源DNA分子進入的細胞,即感受態細胞(Compenent cells).那么,感受態DH細菌細胞轉化方法有哪些嗎?下面就有小編來為您詳細介紹一下吧!
1.制冰盒一個,打開凈化工作臺電源,使其處于工作狀態,以下操作除孵育、振蕩菌液外,其余均需在凈化工作臺內進行。
2.從-80℃冰箱中取出“感受態DH細菌細胞”一支,“試劑A”,從-20℃冰箱中取出無菌雙蒸水一支和待轉化的質粒DNA一支,均置冰盒內。
3.取消毒1.5 ml Eppendorf管一支,用移液器將待轉化質粒DNA 1ul、“試劑A”20 ul、無菌雙蒸水80 ul,分別吸入消毒1.5 ml Eppendorf管內混勻,冰上備用。將感受態DH細菌細胞80-100 ul吸入消毒1.5 ml Eppendorf管內混勻,冰浴20分鐘。隨后,室溫放置10分鐘。
4.在1.5 ml Eppendorf管內加入400ul LB液體培養基,37℃,200rpm振蕩10-40分鐘。
5.隨后取100-600 ul鋪平板,于37℃溫箱培養12-16小時。