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人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒操作步驟
點擊次數:945 更新時間:2018-06-28

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  【信息說明

  中文名稱:人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒

  中文別名:人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA kit

  供應商:上海遠慕

  規格:48t/96t

  保存:2~8℃

  有效期:6個月

  樣本:血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

  用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷。

  特點:靈敏性高、特異性強、重復性好.種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。

  運輸方式:現貨供應,一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨。

  檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本;例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

 

  【使用原理

  1、ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

  2、結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

  3、在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

  4、用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。

  5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。

  6、由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。

 

  【特點說明

  1、專一性強。抗原與抗體的免疫反應是專一反應,而免疫酶技術以免疫反應為基礎,所檢測的對象是抗原(或抗體),使用的抗體除標記了酶以外,與普通抗體的免疫反應特性并無多大差別。

  2、靈敏度高。由于抗體聯結上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應,顯示抗原與抗體的結合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。

  3、樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定,因此有利于樣品的保存。

  4、結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計進行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變,從而引起被檢測物的顯示。

  5、可以定量測定。溶液中的抗原物質,應用酶免吸附技術進行比色測定,依據光密度值的變化,可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行免疫酶技術的定量測定。

  6、可以大規模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測,免疫酶技術都能在較短時間內完成。

 

  【組織結構

  1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

  3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

  5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

  【操作步驟

  1、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  2、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  3、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

  4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

  5、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

  6、溫育:操作同3。

  7、洗滌:操作同5。

  8、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

  9、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

  10、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

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