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Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液使用說明書
【信息說明】
產(chǎn)品名稱：Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液
規(guī)格：100ml/500ml
供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕生化試劑廠家
分類：細(xì)胞組分分離
儲存條件：4℃,12個(gè)月
用途：裂解緩沖液
主要成分：無菌溶液。主要由0.5% Triton X-100、20mM NH4OH、PBS組成。
【使用方法】
A、組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作
1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入3～5倍細(xì)胞沉淀體積的Triton-NH4OH Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心： 4℃，離心5min，棄紅色上清。如無低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6、如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
B、血液樣本的常規(guī)操作
1、取新鮮抗凝血，離心5min，棄上清。
2、 裂解：加入6～10倍細(xì)胞沉淀體積的Triton-NH4OH Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意： 對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液體積的Triton-NH4OH Lysis Buffer進(jìn)行第2步操作，并在4℃或室溫裂解4～15min。
【簡介說明】
在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞，去除紅細(xì)胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Leagene Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液(Triton-NH4OH Lysis Buffer)經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。
本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過Triton-NH4OH Lysis Buffer處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。
【自備材料】
1、胰蛋白酶
2、離心機(jī)
3、PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液
4、胎牛血清
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標(biāo)簽： Triton-NH4OH細(xì)胞裂解液
