動物血清的使用指南,你知道嗎
點擊次數:1100 更新時間:2018-05-14
動物血清的使用指南,你知道嗎?
血清在細胞培養中為細胞提供氨基酸,蛋白質,維生素(特別是脂溶性維生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,生長因子,礦物質及微量元素。此外,血清還可以緩沖培養基,抑制蛋白水解酶,增加培養基的粘度,降低在移液或攪拌時造成的剪切力。
對于動物血清的正確使用,這里做一個簡單的說明。
1、儲存
血清的保質期是5年,儲存溫度-10 ~ -30℃。
血清長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,長期保存血清必須在-10℃以下儲存,并避免反復凍融。
2、解凍
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
如果在37℃或更高的溫度解凍血清,血清中會出現沉淀。此沉淀可能包括磷酸鈣結晶,但不改變血清的性能,同樣血清熱滅活也會導致沉淀的形成。
3、渾濁和沉淀
所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。某些外部因素可能引發纖維蛋白原轉變為纖維蛋白,導致血清解凍后可能會觀察到絮狀物或混濁。這些物質的存在不會改變血清的性能。
如果想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝到無菌離心管中,以低速離心1~2min,上清液即可直接加入到培養基內使用。
注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因為這可能阻塞濾膜。
4、熱滅活處理
通常不使用熱滅活血清,除非某些特定的細胞系特別需要。熱滅活會降低或破壞血清中的生長因子,影響某些細胞的生長。
熱滅活zui初是為了滅活補體及支原體。目前,如果血清中出現支原體,可以通過過濾去除;而去除補體通常是不必要的,除非是在準備或檢測病毒或細胞毒性試驗時。有研究顯示,血清37℃孵育就可以滅活血清中熱不穩定的補體成分,只有很少一部分細胞在這種滅活血清中生長得更好,如胚胎干細胞和許多昆蟲細胞。
1)按正確操作解凍血清,恢復室溫。
2)水浴56℃提前預熱。
3)將準備好的血清和裝有相同體積水的燒杯同時放入水浴鍋,當燒杯中的溫度計指示達到56℃時開始計時,滅活30min后結束,整個過程中需要隨時搖晃混勻。
血清在細胞培養中為細胞提供氨基酸,蛋白質,維生素(特別是脂溶性維生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,生長因子,礦物質及微量元素。此外,血清還可以緩沖培養基,抑制蛋白水解酶,增加培養基的粘度,降低在移液或攪拌時造成的剪切力。
對于動物血清的正確使用,這里做一個簡單的說明。
1、儲存
血清的保質期是5年,儲存溫度-10 ~ -30℃。
血清長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,長期保存血清必須在-10℃以下儲存,并避免反復凍融。
2、解凍
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
如果在37℃或更高的溫度解凍血清,血清中會出現沉淀。此沉淀可能包括磷酸鈣結晶,但不改變血清的性能,同樣血清熱滅活也會導致沉淀的形成。
3、渾濁和沉淀
所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。某些外部因素可能引發纖維蛋白原轉變為纖維蛋白,導致血清解凍后可能會觀察到絮狀物或混濁。這些物質的存在不會改變血清的性能。
如果想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝到無菌離心管中,以低速離心1~2min,上清液即可直接加入到培養基內使用。
注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因為這可能阻塞濾膜。
4、熱滅活處理
通常不使用熱滅活血清,除非某些特定的細胞系特別需要。熱滅活會降低或破壞血清中的生長因子,影響某些細胞的生長。
熱滅活zui初是為了滅活補體及支原體。目前,如果血清中出現支原體,可以通過過濾去除;而去除補體通常是不必要的,除非是在準備或檢測病毒或細胞毒性試驗時。有研究顯示,血清37℃孵育就可以滅活血清中熱不穩定的補體成分,只有很少一部分細胞在這種滅活血清中生長得更好,如胚胎干細胞和許多昆蟲細胞。
1)按正確操作解凍血清,恢復室溫。
2)水浴56℃提前預熱。
3)將準備好的血清和裝有相同體積水的燒杯同時放入水浴鍋,當燒杯中的溫度計指示達到56℃時開始計時,滅活30min后結束,整個過程中需要隨時搖晃混勻。