【胰蛋白酶1：250】用途_溶解方法_化學(xué)性質(zhì)_使用說(shuō)明_注意事項(xiàng)咨訊由上海遠(yuǎn)慕生物詳細(xì)為您提供講述：
【用途】
1、對(duì)電點(diǎn)pI 10.5。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用。
2、重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制。
3、可用于制備單細(xì)胞懸浮液或貼壁細(xì)胞的消化、分離。
4、胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種，在脊椎動(dòng)物中，作為消化酶而起作用。在胰臟是作為酶的前體胰蛋白酶原而被合成的。作為胰液的成分而分泌，受腸激酶，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶，是肽鏈內(nèi)切酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。胰蛋白酶不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。是特異性zui強(qiáng)的蛋白酶，在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中，它成為*的工具。
5、胰蛋白酶為蛋白質(zhì)水解酶，能選擇地水解蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈，能消化溶解變性蛋質(zhì)，對(duì)未變性的蛋白質(zhì)無(wú)作用，因此，能使膿、痰液、血凝塊等分解、變稀，易于引流排除，加速創(chuàng)面凈化，促進(jìn)肉芽組織新生，此外還有抗炎癥作用。臨床上用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、瘺管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等。噴霧吸入，用于呼吸道疾病。也可用于治療毒蛇咬傷。還常用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前對(duì)組織的處理。
【溶解方法】
方法一、用90ML無(wú)Ca、Mg離子PBS溶解胰蛋白酶，再加該P(yáng)BS至100ML(該酶溶解較難，必要時(shí)在4度過(guò)夜以便溶解)。用時(shí)調(diào)PH7.2左右，用5.6%NaCO3調(diào)試。
方法二、維持反應(yīng)鍋內(nèi)溶液80℃的溫度至少半小時(shí)，然后由夾層通入自來(lái)水降低鍋內(nèi)溶液溫度至 50 ℃，按 1∶30的酶/底物比加入需要量的胰蛋白酶，在攪拌器連續(xù)攪拌下開(kāi)始酶解反應(yīng)，期間調(diào)整通入反應(yīng)鍋夾層的蒸汽量使溫度維持在50℃。酶解反應(yīng)過(guò)程中，為保證胰蛋白酶的zui大生物活性使反應(yīng)液的pH維持在8.0，這就需要不斷在反應(yīng)液中加入NaOH稀溶液。自加入胰蛋白酶起6h后酶解反應(yīng)結(jié)束。
方法三：準(zhǔn)確稱取NaCl 8.00g，KCl 0.40g、Na2HPO4·7H2O 0.09g、KH2PO4 0.06g、酚紅0.01g、NaHCO3 0.35g，溶解于約800mL五蒸水中，充分溶解后定容至1000mL，分裝，滅菌備用，制成D-hanks液。準(zhǔn)確稱取胰蛋白酶0.125g，溶解于100mL D-hanks液中，于4℃過(guò)夜，過(guò)濾分裝，-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>
【胰蛋白酶1：250】詳細(xì)說(shuō)明
【化學(xué)性質(zhì)】
性狀：由豬胰提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，淡黃色粉末。
溶解性：不溶于乙醇、甘油、lv仿和yi醚。
特性：糜蛋白酶(U/mg)≤75
水分(%) ≤5.0 胰島素(U/mg) >250
R：36/37/38-42/43 S：36/37/39
保存條件：2-8℃
【使用說(shuō)明】
本胰蛋白酶可用于制備單細(xì)胞懸浮液，胰蛋白酶在用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，可用PBS溶解成濃度為0.25%，也可以加入0.02%EDTA ，過(guò)濾除菌后使用，溶液為-20℃保存。
【注意事項(xiàng)】
1. 所有用品均需要高溫高壓，以滅活殘余的DNA酶。
2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
3. 用大口滴管或吸頭操作，以盡量減少打斷DNA的可能性。
4. 用上述方法提取的DNA純度可以滿足一般實(shí)驗(yàn)(如Southern 雜交、PCR等)目的。如要求更高，可參考有關(guān)資料進(jìn)行DNA純化。
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