核糖核酸酶A是內切核糖核酸酶,可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端,切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應終產物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無輔因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復合物(Puskas et al.1982)所抑制。
核糖核酸酶A用途
生化研究,測定核酸的結構
RNase 保護檢測
去除非特異結合的RNA
分析RNA 序列
水解蛋白樣品中的RNA
純化DNA
此外,它具有顯著的細胞毒性,可以殺滅許多腫瘤細胞系,可以抑制導致艾滋病的HIV-1病毒在細胞中的復制,可以治療乙肝。
1、從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。
2、確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985,Winter et al.1985)。 在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯配可被RNA酶A識別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動子的質粒,在體外合成與野生型DNA或RNA互補的32p標記RNA探針,然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火, 所產生的單堿基錯配可用RNA酶A切割,通過凝膠電泳分析切割產物的大小即可確定錯配的位置。在所有各種可能的單堿基錯配中,大約50%可用此法確定。
核糖核酸酶A生產方法
由紅霉素產生的蓖的發(fā)酵液提取。
以牛胰為原料,稀硫酸勻漿后用硫酸銨分級沉淀,再經重結晶、羧甲基纖維素柱層析得產品。
以牛胰為原料稀酸抽提后用硫酸銨分級沉淀,在乙醇中重結晶制取。
核糖核酸酶A化學性質
白色結晶或凍干粉,易溶于水,pI7.8,zui適pH值7.7。穩(wěn)定性:zui穩(wěn)定 pH范圍2-4.5,冷藏凍干粉或結凍的酶液可保存數年活力不變。抑制劑有脫氧核糖核酸(競爭性抑制劑)、變性脫氧核糖核酸(比天然的更有效)、 0.0005 mol/L Mg2+。酶反應:專一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯鍵的裂開,形成具有2',3'-環(huán)磷酸衍生物寡聚核苷酸。
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