DEAE 纖維素 DE-32使用說明書由上海遠慕生物提供,本司現貨銷售ELISA試劑盒,標準品對照品,動物血清,瓊脂糖凝膠,葡聚糖凝膠,培養基,抗體,抗原,酶類,生化試劑,化學試劑,多肽,生物分子,微生物,實驗耗材,染色液,溶液,緩沖液,維生素,蛋白質,其他試劑等,歡迎選購!
DEAE 纖維素 DE-32使用說明書
DEAE 纖維素 DE-32簡介說明
DEAE-纖維素,它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物,表面又用大分子糖鏈接枝,使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,保持更高載量,同時又具有更好的分辨率。由于比表面積大,平衡和洗脫的時間也更短。它經過接枝即使是純化病毒,質粒等超大分子的物質,載量基本保持不變。
DEAE 纖維素 DE-32處理方法
1、先將干粉的纖維素浸泡在蒸餾水中,一段時間大約1小時左右,去除雜質,抽干一下。
2、再用0.1mol/l的醋酸溶液浸泡2小時,用去離子水洗凈至PH中性,并抽干。
3、將抽干的纖維素再浸泡在0.1mol/l的NaOH溶液中2小時,用去離子水洗至中性,抽干。即可用了。
DEAE 纖維素 DE-32操作步驟
1、色譜柱裝填
a、所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣,液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時裝柱即可,如果不好溶脹,可適當加熱。
b、在柱子下端加入20%乙醇,以除去柱子中的空氣,關閉柱子出口,在柱內保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產生氣泡,可以在里面加1%吐溫避免氣泡產生。也可以換成純水裝柱子,但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水,具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進行,也可以小心傾去填料上的20%乙醇,再換成5倍體積的純水,反復沉淀去上清,5次左右就可以用于裝柱子。
c、此填料顆粒比較細,所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網,不能漏,也可以取點填料加到篩網上試試,如果沒有問題再將填料連續倒入柱子時,要用玻璃棒的緊靠柱子內壁引流,以減少氣泡的產生,讓填料先自然沉降到填料體積不再變化,而填料和上面的液體很好分層,上層溶液*澄清,就可以開泵用適當的流速壓柱子,填料體積不再變化后,再把轉換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
d、在裝柱子前,填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個小時,這樣避免裝柱子時由于溫度變化而使柱子中產生氣泡。
2、蛋白的結合
樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致,鹽濃度過高或者pH帶低也許掛不上,所以要根據自己的樣品做適當調整。
3、蛋白的洗脫
這個填料如果采用線性梯度洗脫,柱子的直徑和高度比是大于10,數值越大越有利于分離,而且樣品別上太多,可以按約10mg/ml上樣,如果采用階段洗脫的方法,裝短粗柱子就可以,上樣量也沒有限制。階段洗脫容易放大,重復性好,如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法*根據自己需要。
4、再生清洗
a、用完之后用0.1M醋酸洗5個柱體積,然后用2MNaCl洗5個床體積,再用水洗至中性,然后用20%乙醇保存。
b、有機溶劑和水混合很容易產生氣泡,為了避免這樣情況,可以把配好的有機溶劑在室溫放置過夜,再使用,這樣可以避免氣泡進柱子而導致柱子不能正常使用。
DEAE 纖維素 DE-32注意事項
上樣之前,樣品至少用0.45微米膜過濾,盡量去除色素,否則色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。
在使用過程中,不能使用強酸強堿,酸和堿的濃度應低于0.15摩爾。
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