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【明膠-瓊脂糖凝膠4FF】參數_使用方法
點擊次數:1473 更新時間:2018-03-30

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【明膠-瓊脂糖凝膠4FF參數說明】

中文名:明膠-瓊脂糖凝膠4FF

英文名:Gelatin Sepharose 4FF

供應商:上海遠慕

規格:25ml、100ml

基質:4%交聯瓊脂糖

形狀:球形

粒徑:45~165 μm

耐壓:0.3MPa

耐熱:120℃,pH7,水中20min

zui高流速:250cm/h

排阻極限:60000~20×106 (球蛋白)

【明膠-瓊脂糖凝膠4FF】參數_使用方法

【明膠-瓊脂糖凝膠4FF】參數_使用方法

 

【明膠-瓊脂糖凝膠4FF簡介】

明膠-瓊脂糖凝膠4FF是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠4FF基質上的一種親和層析填料;明膠是一種高分子糖蛋白,在多種細胞的表面和許多細胞外液(包括血漿)中都發現了明膠的存在,它可以特異性的結合纖維連接蛋白;明膠瓊脂糖凝膠4FF是專為純化或除去纖維連接蛋白的一種親和層析填料。

 

【明膠-瓊脂糖凝膠4FF使用方法】

1、準備凝膠

a、讓凝膠和所有的試劑達到工作時的溫度。

b、配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

c、明膠瓊脂糖凝膠4FF是保存在20%的乙醇溶液中,取適量凝膠,清洗掉20%的乙醇,抽干。用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。

2、裝柱

a、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。

b、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。

c、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

3、平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。

4、上樣

a、樣品用平衡液配制,常用磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

5、洗脫

明膠-瓊脂糖凝膠4FF可以采用不同的方式洗脫纖維連接蛋白:

a、使用含有溴鹽的緩沖液,例如溴化鈉或溴化鉀,并在低于平衡緩沖液pH值的條件下洗脫。一種推薦的洗脫緩沖液是:0.05M的醋酸鈉,pH值5.0,含1.0M的溴化鈉或溴化鉀。

b、可以在平衡緩沖液中加入8M的脲,來洗脫吸附在凝膠上的纖維連接蛋白。

c、纖維連接蛋白還可以通過在平衡緩沖液中添加精氨酸來進行洗脫。

6、再生

根據樣品的性質,明膠瓊脂糖凝膠4FF可以再生,以達到重復使用的目的。可以采用2-3柱體積的高pH值(0.1M的Tris-HCl,0.5MNaCl,pH值8.5)的緩沖液和低pH值(0.1MNaAC,0.5MNaCl,pH值4.5)的緩沖液交替清洗凝膠。一個周期重復3次,然后用3-5倍柱體積的平衡緩沖液平衡,即可進行下次試驗。如果在純化過程中使用了洗滌劑或變性劑 (如8M尿素),那么這些洗滌劑也可以用于洗脫緩沖液中。

7、清洗

在一些應用中,像變性的蛋白質或脂類這樣的樣品,在再生過程沒有被洗脫下來,可以通過加入一些洗滌劑,例如:0.1%的TritonX-100,在37°C的條件下洗一會。立即用至少5倍柱體積的結合緩沖重新平衡。

8、儲存

明膠-瓊脂糖凝膠4FF應儲存在4-8℃,20%的乙醇溶液中。

特別注意:上樣之前,樣品必須去除色素,否則色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。

 

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