上海遠慕生物詳細講述【羧基-瓊脂糖凝膠 4B】使用方法及參數說明等咨訊,本司現貨供應ELISA試劑盒,標準品對照品,動物血清,培養基,抗體,生物分子,微生物,生化試劑,化學試劑,溶液,緩沖液,染色液,實驗耗材,酶類,細胞株,其他試劑等,歡迎訂購!
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B參數說明】
中文名:羧基-瓊脂糖凝膠 4B
英文名: ECH Sepharose 4B
供應商:上海遠慕
基質:4%瓊脂糖凝膠
耦合基團:氨基
顆粒大小:90μm
zui大流速:75cm/h
工作pH:3-14
操作溫度:室溫
保存條件:貯存于4°C-8°C(保存溶液為20%乙醇)
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B】使用方法
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B簡介說明】
羧基-瓊脂糖凝膠4B是用由環氧樹脂耦合方法將6-氨基已酸共價鍵偶聯到瓊脂糖4B上;羧基-瓊脂糖凝膠4B含有一個10個碳原子連接臂自由羧基,耦合氨基基團的配體;長長的間隔臂使它特別適合固定的小分子。
【羧基-瓊脂糖凝膠 4B使用方法】
1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;
4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;
5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;
7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
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