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【賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B參數說明】
中文名:賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B
英文名lysine Sepharose 4B
供應商:上海遠慕
規格:25ml、100ml
基質:6% 交聯瓊脂糖凝膠
配基:賴氨酸
配基密度:4-7μmol/mL
顆粒大小:45-165μm
每毫升結合量:0.6mg血纖維蛋白溶酶原
zui大流速:75cm/h
工作pH:2~11
化學穩定性:在所有的水溶性緩沖液中保持穩定
操作溫度:室溫
【賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B】參數說明_操作步驟_注意事項_簡介
【賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B操作步驟】
1、裝柱
a、將所有的試劑和填料達到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
b、根據柱子大小取所需凝膠的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
c、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
d、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意不要使用氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定;用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2、平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。
3、上樣
可以根據上樣物質的性質選擇合適pH的緩沖液,通常建議使用pH 為7.5的磷酸鹽緩沖液。
4、洗脫
通常使用zui高2M濃度的鹽溶液進行洗脫,也可以選擇梯度洗脫或者溫度梯度洗脫。
5、再生
再生取決于樣品的性質,賴氨酸瓊脂糖4 B可以用2 - 3床體積的gaopH值(0.1 M Tris-HCl,0.5 M氯化鈉,pH值8.5)和低pH值(0.1 M醋酸鈉,0.5 M氯化鈉,pH值4.5)交替洗滌再生;重復3次,緩沖液每次至少5柱床體積。
如果在分離的過程中使用了去垢劑或者變性劑,在再生的過程中也可以使用;純化纖溶酶原后,應該使用pH為7.5的 50 mM(含有1 M氯化鈉和0.2 Mε-氨己酸)的磷酸鹽再生;核酸純化后,用至少5倍柱體積的pH為7.5的的50 mM的磷酸鹽(含2 M氯化鈉)清洗再生。
6、在位清洗
在一些使用的程序中,如果存在不容易洗脫的沉淀蛋白或者脂類物質,可以用0.1%的Triton沖洗一分鐘,清洗完畢后,立刻用至少5倍柱體積緩沖液平衡柱子。
【賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B注意事項】
1、凍干的賴氨酸瓊脂糖凝膠4B 密封貯存于8°C以下干燥的地方,溶脹的凝膠應貯存在4-8°C(保存溶液為20%乙醇),不能冷凍。
2、在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入。
【賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B簡介說明】
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B是利用溴化氰法通過賴氨酸的α-氨基將其鍵合在瓊脂糖凝膠上,賴氨酸上游離的ε-氨基和α-羧基可以和一系列的生物分子相互作用;主要用于纖維蛋白溶酶原、血纖維蛋白溶酶原激活劑和核蛋白體核糖核酸的分離以及雙鏈DNA的純化。
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