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【胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B】參數(shù)說(shuō)明_操作步驟_分離技巧
點(diǎn)擊次數(shù):1383 更新時(shí)間:2018-03-27

胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B由上海遠(yuǎn)慕生物現(xiàn)貨供應(yīng),本司供應(yīng)的瓊脂糖凝膠產(chǎn)品非常多,主要有:精氨酸-瓊脂糖凝膠 4B ,羧基-瓊脂糖凝膠 4B,苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF ,肝素-瓊脂糖凝膠 H.P. ,谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 4B,藍(lán)色-瓊脂糖凝膠 CL-6B ,苯基-瓊脂糖凝膠 6FF,丁基-瓊脂糖凝膠 4FF ,更多系列請(qǐng)!

 

胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B參數(shù)說(shuō)明

中文名:胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B

英文名:Trypsin Sepharose 4B

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

凝膠類(lèi)型:疏水層析填料

粒徑: 45-165μm

工作PH值:3-12

操作溫度:4-40℃

結(jié)構(gòu)成分:4%交聯(lián)瓊脂糖

包裝:25毫升/瓶,100毫升/瓶

配基偶聯(lián)量:40μmol phenyl/ml 凝膠

保存條件:4℃

性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中

應(yīng)用:疏水層析介質(zhì),適合含芳香族配體蛋白純化,特別適合單抗的純化等

【胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B】參數(shù)說(shuō)明_操作步驟_分離技巧

【胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B】參數(shù)說(shuō)明_操作步驟_分離技巧

 

胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B操作步驟

1、裝柱

凝膠過(guò)濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過(guò)柱子上加一個(gè)裝柱器來(lái)使分離柱裝滿(mǎn)凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。

以下過(guò)程為通用介質(zhì)裝填過(guò)程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。

讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

選擇一根一定直徑的柱子,長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。不要?jiǎng)×覕噭?dòng),以免攪壞微球。

將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液緩慢流過(guò),使柱床穩(wěn)定。

用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。

2、平衡

讓緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。

3、上樣

樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理,再上樣。

介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的,分子量大的先流出來(lái)。

上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。

4、洗脫

用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生

一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。

6、注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

 

胰蛋白酶-瓊脂糖凝膠 4B分離技巧

1、 分離時(shí)流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達(dá);接餾分時(shí)可開(kāi)全速,節(jié)省時(shí)間。

2、柱子盡可能長(zhǎng),葡聚糖凝膠柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢(shì)兵力,打擊敵人。

3、餾分一定要接的細(xì),可1/10,或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。

4、 洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積,對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物,可洗脫5個(gè)保留體積。

5、鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)

6、葡聚糖凝膠對(duì)黃酮類(lèi)成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻(xiàn)參考。

7、填料反復(fù)使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái),待用。暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長(zhǎng)期不用時(shí),可在以上處理基礎(chǔ)上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無(wú)醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

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