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【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P.參數說明】
中文名:谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P.
英文名:Glutathione Sepharose H.P.
供應商:上海遠慕
規(guī)格:10ml、50ml
保存溫度:4-8℃
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-40 ×106
凝膠類型:凝膠過濾填料,凝膠層析介質
應用:蛋白、大分子復合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測定。
【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 】參數說明_使用方法_注意事項
【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 注意事項】
1、不同配基的偶聯(lián)方法與上面類似,但是反應的條件例如:配基加入量,反應時間,反應溫度應根據配基的不同進行適當的調整;
2、可用碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液做為偶聯(lián)緩沖液,但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的緩沖液。
3、產品應密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20%乙醇),通風、干燥、清潔的地方。
4、不能冷凍。
5、用過的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。
【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法】
1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;
4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;
5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免;難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;
7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
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