上海遠幕生物現貨供應藍色-瓊脂糖凝膠 CL-6B,藍色-瓊脂糖凝膠 6FF ,紅色-瓊脂糖凝膠 6FF,肝素-瓊脂糖凝膠 6FF,肝素-瓊脂糖凝膠 H.P.,谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 4B不同型號的瓊脂糖凝膠,詳細講述藍色-瓊脂糖凝膠 CL-6B使用說明等咨訊,了解更多瓊脂糖凝膠產品請!
藍色-瓊脂糖凝膠 CL-6B參數說明
中文名:藍色-瓊脂糖凝膠 CL-6B
英文名: Blue Sepharose CL-6B
供應商:上海遠慕
規格:25ml、100ml
工作PH值:3-12
操作溫度:4-40℃
結構成分:6%交聯瓊脂糖
保存條件:4℃
性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中
應用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測定等
藍色-瓊脂糖凝膠 CL-6B使用說明
藍色-瓊脂糖凝膠 CL-6B操作步驟
1、裝柱:
a、讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
b、根據柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
c、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
d、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2、平衡:
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液,如Tris 、PBS等。
3、上樣:
a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。
b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
c、介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質、流動相的離子強度和pH值。鹽濃度小,介質對樣品組分吸附較牢。用DEAE介質時,推薦的pH值是大于目標產品等電點1個單位。
4、洗脫:
DEAE介質可用增大鹽濃度或減小pH值進行洗脫,常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
5、再生:
一般用高鹽濃度的緩沖液(含1~2mol/L NaCl)洗或減小pH洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用;若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6、在位清洗:
a、對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。
b、對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類,可用1M NaOH 去除。
c、對強疏水性結合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡;清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7、注意:
在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入;在使用過程中,不能使用強酸,如使用酸洗,應使用濃度低于0.1 M的冰醋酸。
8、去熱源:
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除:
a、2倍柱體積的70%乙醇;
b、2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5;
c、1倍柱體積4M尿素;
d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl;
e、以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
9、消毒:
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
10、滅菌:
置介質于高壓滅菌鍋中120℃下30分鐘。
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