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鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.使用方法及注意事項
點擊次數:1805 更新時間:2018-03-20

上海遠慕生物詳細為您講述鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.的使用方法,注意事項及其他參數等咨訊,本司所供應的試劑品種齊全,包含ELISA試劑盒,標準品對照品,動物血清,培養基,抗體,瓊脂糖凝膠,葡聚糖凝膠,染色液,溶液,緩沖液,實驗耗材,化學試劑,生化試劑,細胞株,多肽,其他試劑等,價格實惠,歡迎訂購!

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.參數說明

中文名:鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.

英文名:Ni Sepharose H.P.

供應商:上海遠慕

產地:進口,國產

工作PH值:3-12

結構成分:6%交聯瓊脂糖

平均粒徑:34µm

操作溫度:4-30℃

配基基團:Ni2+

配體密度:15μmol/ml

保存溫度:4℃

凝膠類型:小配體親和色譜填料

性狀:凝膠狀,保存在20%酒精溶液中

應用:分離帶His標簽的重組蛋白及能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白,高分辨率。

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法及注意事項

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法及注意事項說明

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 說明

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 是用于純化6×His標簽重組蛋白的一種純化介質,它是由6%交聯的Sepharose耦連了一種四齒螯合劑NTA而得;它可用于在非變性或變性條件下純化任何表達系統表達的6×His標簽重組蛋白。NTA,含有四個螯合區,較一般的三齒螯合劑能更好的結合Ni2+;6×His可與Ni2+螯合,從而使His標簽蛋白結合在Ni-NTA純化介質上,未結合的蛋白被洗滌下去,結合在介質上的蛋白經過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液的溫和洗脫下來,從而得到高純度的目的蛋白;該純化介質與His標簽蛋白具有*的親和力,可達5-20 mg/mL。可在非變性和變性條件下純化任何表達系統所得的His標簽蛋白;純化程序簡單,所得的蛋白純度可高達95%;Ni-NTA可再生4-6次,重復使用。本產品懸浮液為20%乙醇,已螯合Ni2+。

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法

1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;

2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;

3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免;難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;

7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 注意事項

1、一般都用藥匙取用。藥匙的兩端為大小兩個匙,分別取用大量固體和少量固體。

2、試劑一旦取出,就不能再倒回瓶內,鎳NTA瓊脂糖凝膠6FF可將多余的試劑放入容器。

3、稱量的天平應保持清潔、干燥,避免潮濕及腐蝕性氣體的侵蝕。在進行稱量操作時,被稱取的試劑應置于稱量紙上或其它器皿內,不可在盤中直接稱量。

 

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標簽:鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.

 

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