丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明書由上海遠慕生物提供,本司現貨代理銷售ELISA試劑盒,動物血清,標準品對照品,培養基,抗體,瓊脂糖凝膠,染色液,溶液,緩沖液,實驗耗材,生化試劑,化學試劑及其他試劑,品種齊全,滿足于用戶的實驗需求,價格便宜,有進口試劑及國產試劑之分,訂購!
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數說明
中文名:丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.
英文名: Butyl -Sepharose H.P.
供應商:上海遠慕
凝膠類型:疏水層析填料
粒徑: 45-165μm
工作PH值:3-12
操作溫度:4-40℃
結構成分:4%交聯瓊脂糖
包裝:25毫升/瓶,100毫升/瓶,大包裝
配基偶聯量:40μmol phenyl/ml 凝膠
保存條件:4℃
性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中
應用:疏水層析介質,適合含芳香族配體蛋白純化,特別適合單抗的純化等。
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明
丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.操作步驟
1、裝柱:
a、讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
b、根據柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
c、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
d、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2、平衡:
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3、上樣:
a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
c、介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強,介質對組分吸附牢。
4、洗脫:
疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫;加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。
5、再生:
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用;若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6、在位清洗:
a、對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。
b、對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。
c、對強疏水性結合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡;清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入。
8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時;或用以下方法步驟去除:
a、2倍柱體積的70%乙醇;
b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;
c、1倍柱體積4M尿素;
d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
特別注意:上樣之前,樣品必須去除色素,否則色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。
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