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上海遠慕生物科技有限公司

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用說明書
點擊次數:1402 更新時間:2018-03-15

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辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數說明

中文名:辛基-瓊脂糖凝膠 H.P. 

英文名:octyl -Sepharose H.P.

供應商:上海遠慕

規格:25ml、100ml、500ml

性狀:白色微球

凝膠類型:疏水層析介質

粒徑: 45-165µm

工作PH值:3-13

應用:疏水層析介質,適合生物大分子和疫苗的分離純化等。

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用說明書

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P. 

 

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.分離技巧

1、分離時流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達;接餾分時可開全速,節省時間。

2、柱子盡可能長,葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優勢兵力,打擊敵人。

3、餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

5、鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻參考。

7、填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用。暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長期不用時,可在以上處理基礎上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.使用方法

1.裝柱:

a、讓所有的材料和試劑達到室溫;配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

b、根據柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。

c、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。

d、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡;打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。

e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定;用2~3柱體積的緩沖液平衡柱子。

2.平衡:

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變;平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上樣:

a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。

c、介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度;鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強,介質對組分吸附牢。

4.洗脫:

疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫;加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生:

一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用;若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗:

a、對于以離子鍵結合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。

b、對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。

c、對強疏水性結合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡;清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.去熱源:

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時;或用以下方法步驟去除:

a、2倍柱體積的70%乙醇;

b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;

c、1倍柱體積4M尿素;

d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl;上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

8.消毒:

用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

 

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