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苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B使用說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù):2100 更新時(shí)間:2018-03-14

苯基-瓊脂糖凝膠CL-4B是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠CL-4B上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì);本文將詳細(xì)為您講述苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B使用說(shuō)明及其他咨訊!

 

苯基-瓊脂糖凝膠CL-4B參數(shù)說(shuō)明

中文名:苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B

英文名:Phenyl-Sepharose CL-4B

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

凝膠類型:疏水層析填料

粒徑: 45-165μm

工作PH值:3-12

操作溫度:4-40℃

結(jié)構(gòu)成分:4%交聯(lián)瓊脂糖

包裝:25毫升/瓶,100毫升/瓶,大包裝

配基偶聯(lián)量:40μmol phenyl/ml 凝膠

保存條件:4℃

性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中

應(yīng)用:疏水層析介質(zhì),適合含芳香族配體蛋白純化,特別適合單抗的純化等

適用范圍:苯基-瓊脂糖凝膠CL-4B是一種疏水層析介質(zhì),利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。

苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B使用說(shuō)明

苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B

 

苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B保存條件

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃(保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉),通風(fēng)、干燥、清潔的地方;不能冷凍;用過(guò)的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。

 

苯基-瓊脂糖凝膠 CL-4B操作步驟

1、裝柱:

a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。

c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。

d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

e、打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò),使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

2、平衡:

讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3、上樣:

a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。

b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

c、介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng),介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。

4、洗脫:

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫;加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。

5、再生:

一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

6、在位清洗:

a、對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。

b、對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。

c、對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。

8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí);或用以下方法步驟去除:

a、2倍柱體積的70%乙醇;

b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;

c、1倍柱體積4M尿素;

d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。

9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

特別注意:上樣之前,樣品必須去除色素,否則色素會(huì)被吸附到填料上,影響填料的正常使用。

 

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