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瓊脂糖凝膠6B說明書
點擊次數:1745 更新時間:2018-03-01

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瓊脂糖凝膠6B參數說明

中文名:瓊脂糖凝膠6B

英文名:Sepharose 6B

供應商:上海遠慕

基質:6%高度交聯瓊脂糖凝膠

規格:5g

操作溫度:4-40℃

zui大流速:300cm/h

性狀:白色膠體

保存溫度:4-8℃

瓊脂糖凝膠6B分離范圍:10,000-4 ×106

類型:凝膠過濾填料,凝膠層析介質

用途:親和層析介質

應用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測定等

瓊脂糖凝膠6B說明書

瓊脂糖凝膠6B

   

瓊脂糖凝膠6B操作步驟

 該環氧活化瓊脂糖凝膠介質可以和含有氨基、巰基或羥基的親和配基的蛋白質、多肽、糖等物質偶聯。具體的偶聯方法如下(偶聯BSA為例):

洗滌:用10-20倍膠體積的去離子水沖洗保存存儲液中的環氧活化膠,除去存儲液,抽干;

偶聯:稱取200mg BSA,溶于10ml 0.1M pH 9.0碳酸鈉緩沖液,加入到洗滌抽干的活化膠中,在37℃搖床上振蕩12-24h偶聯,偶聯完畢后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干;

封閉:將抽干的偶聯BSA的膠加入到100 ml三角瓶中,加入30 ml 1 mol/L乙醇胺溶液。攪拌速度120 rpm,37 ℃條件下反應4h,然后將料液轉移到砂芯漏斗中抽干。

清洗:然后依次用5倍的去離子水、0.1 M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH 4.0)、去離子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸鈉緩沖液(pH 8.0)和去離子水充分洗滌后,抽干。

保存:保存于4℃、20%乙醇溶液中。

 

瓊脂糖凝膠6B注意事項

1、不同配基的偶聯方法與上面類似,但是反應的條件例如:配基加入量,反應時間,反應溫度應根據配基的不同進行適當的調整;

2、可用碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液做為偶聯緩沖液,但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的緩沖液。

 

瓊脂糖凝膠6B分離技巧:

1、分離時流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達;接餾分時可開全速,節省時間。

2、柱子盡可能長,葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優勢兵力,打擊敵人。

3、餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

5、鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻參考。

7、填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用。暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長期不用時,可在以上處理基礎上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

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標簽:瓊脂糖凝膠6B

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