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葡聚糖凝膠G-100使用方法
點擊次數:10845 更新時間:2018-01-30

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葡聚糖凝膠G-100參數說明

中文名:葡聚糖凝膠G-100

中文別名:交聯葡聚糖凝膠 G-100,交聯右旋糖酐凝膠 G-100

英文名:Sephadex G-100

供應商:上海遠慕

干顆粒直徑: 40~120 μm

分子量分級范圍:A.肽及球形蛋白質:4000~150000;B. 葡聚糖(線性分子):1000~100000

床體積毫升/克干分子篩:12~15ml/g

PH:2~13

應用:利用分子篩作用;進行多肽分離,脫鹽,清洗生物提取液,分子量測定

性狀:白色微球,多孔

凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠

結構成分:交聯右旋糖酐

保存:4-25℃

葡聚糖凝膠G-100使用方法

葡聚糖凝膠G-100使用方法

 

1、葡聚糖凝膠預處理:在室溫下,將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,或者用蒸餾水煮沸至少1小時直至充分溶脹,凝膠體積不再變化。

注:在溶脹前,加入蒸餾水攪拌后使其自然沉降,沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒較多,需要重復多次漂洗將其除去,防止層析時阻塞凝膠柱,影響流速。

2、裝柱:將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;裝柱要均勻,可在凝膠耐受的操作壓下裝柱,裝好的凝膠柱可以檢測柱效,檢測過濾柱裝填是否合格。

凝膠層析分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度:分級分離時,一般需要 100cm 左右長的層析柱,柱高與直徑之比為 20:1-100:1,柱高過高時,凝膠擠壓變形阻塞會引起較大的反壓,應當盡可能避免;分組分離(例如脫鹽)時用短柱,柱高控制在40-50cm 以下,柱高與直徑的比約為 5:1-10:1。

3、平衡:上樣前用平衡液平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

4、上樣:分級分離時上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整,脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積;樣品溶液如有雜質或沉淀應過濾或離心除去,樣品的粘度不能過高,否則影響分離效果。

5、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

6、在位清洗(CIP):凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧hua鈉反向清洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

7、保存:凝膠柱暫時不用,可將其回收,一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干,可加入0.02%疊氮hua鈉防腐或用20%乙醇浸泡,以控制微生物生長。

 

葡聚糖凝膠G-100分離技巧:

1、分離時流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達;接餾分時可開全速,節省時間。

2、柱子盡可能長,葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱.

3、餾分一定要接的細,可1/10,或1/20個保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

5、鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用SephadexLH20分鞣質.

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻參考。

7、填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用;暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用;如長期不用時,可在以上處理基礎上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

葡聚糖凝膠G-100性狀說明

色珠粒或粉末,屬親水性凝膠!性穩定,不溶于水,弱酸和堿溶液,遇強酸糖甘鍵分解用于凝膠過濾,在強酸中凝膠骨架的糖甘鍵被水解。

 

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