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葡聚糖凝膠G-10操作步驟
點擊次數:3660 更新時間:2018-01-25

上海遠慕生物詳細為您介紹葡聚糖凝膠G-10操作步驟,分離技巧及其他咨訊說明,本司所供應的葡聚糖凝膠系列產品有很多,包含有:葡聚糖凝膠LH-20葡聚糖凝膠LH-60,葡聚糖凝膠G-15,葡聚糖凝膠G-25,葡聚糖凝膠G-50,葡聚糖凝膠G-75,葡聚糖凝膠G-100,葡聚糖凝膠G-150,葡聚糖凝膠G-200,更多產品請!

 

中文名:葡聚糖凝膠G-10

中文別名:交聯葡聚糖凝膠G-10;交聯右旋糖酐凝膠G-10

英文名:Sephadex G-10

供應商:上海遠慕

包裝:25g,100g,500g

PH:2~13

保存:RT

干顆粒直徑:40~120um

床體積毫升/克干分子篩:2~3ml/g

性狀:白色珠粒或粉末,屬親水性凝膠;性穩定,不溶于水,弱酸和堿溶液,遇強酸能使糖苷鍵分解

葡聚糖凝膠G-10操作步驟

葡聚糖凝膠G-10

 

葡聚糖凝膠G-10操作步驟

1、乙醇浸泡在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時;并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。

2、無鹽水浸泡室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹。

3、鹽酸浸泡在常溫下再用0.1MHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性。

4、裝柱將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層。

5、平衡上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

6、上樣凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積;柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免;難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可。

7、洗脫方法可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

8、清洗每次用完之后,將柱子里的緩沖液置換為去離子水,然后用20%的乙醇封存。

9、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用0.1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

 

葡聚糖凝膠G-10分離技巧

1、分離時流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達;接餾分時可開全速,節省時間。

2、柱子盡可能長,葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。

3、餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

5、鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用SephadexLH20分鞣質。

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻參考。

7、填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用;暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用;如長期不用時,可在以上處理基礎上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

葡聚糖凝膠G-10說明:

葡聚糖凝膠有不同的粒度!超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜,粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速;另外,粗級也可用于批量工藝。

化學穩定性葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解);它在水,鹽溶液,堿和弱酸性溶液中都是穩定的,在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解;長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。

物理穩定性葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態,中性PH進行滅菌;干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化,葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。

G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同;葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

 

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關鍵詞:葡聚糖凝膠G-10

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