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中文名:Hoechst33258染色液(1mg/ml)
供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格:1ml
分類:細(xì)胞染色
保存:—20℃,避光,12個(gè)月
用途:細(xì)胞凋亡檢測(cè),普通細(xì)胞核染色,常規(guī)的DNA染色。
說明:Hoechst33258染色中l(wèi)eagene公司推薦采用該試劑;Hoechst33258是一種熒光染料,可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較低;染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè),可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色,也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。
Hoechst33258染色液(1mg/ml)
Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步驟:
1、固定的組織細(xì)胞染色
a.對(duì)于細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑;隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色,則先進(jìn)行免疫熒光染色,染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33258染色;如果不需要進(jìn)行其它染色,則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst33258染色。
b.對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片,加入少量Hoechst 33258工作液,覆蓋住樣品即可;對(duì)于懸浮細(xì)胞,至少加入待染色樣品3倍體積的工作液,混勻;室溫放置3-5分鐘。
c.吸除Hoechst33258染色液,用TBST,PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。
d直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察;細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。
2、活細(xì)胞染色
a.根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求,用無菌去離子水稀釋到自己所需濃度,即為Hoechst33258染色工作液;細(xì)胞核染色時(shí),一般推薦工作濃度為1~5μg/ml。
b.取96,24,6孔板培養(yǎng)細(xì)胞至合適狀態(tài);按96孔板加入100μl,24孔板加入500μl,6孔板加入1ml的比例,加入適當(dāng)?shù)腍oechst33258染色液,染液必須充分覆蓋細(xì)胞。
c.在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的條件下培養(yǎng)。
d,輕輕吸除Hoechst33258染色液。
e.用無菌的PBS或生理鹽水清洗2~3次。
f.進(jìn)行熒光檢測(cè)。
Hoechst33258染色液(1mg/ml)注意事項(xiàng):
1、Leagene Hoechst33258染色液(1mg/ml)應(yīng)稀釋至合適的濃度后使用。
2、熒光染料都存在淬滅的問題,為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑;建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè),活細(xì)胞或組織染色后應(yīng)立即觀察。
3、避免反復(fù)凍融,否則容易失效。
4、Hoechst33258對(duì)人體有一定刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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標(biāo)簽:Hoechst33258染色液(1mg/ml)