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葡聚糖凝膠G-75使用方法
點擊次數:4042 更新時間:2018-01-10

葡聚糖凝膠G-75使用方法詳細介紹

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中文名:葡聚糖凝膠G-75

中文別名:交聯葡聚糖凝膠 G-75;交聯右旋糖酐凝膠 G-75

英文名稱:Sephadex G-75

供應商:上海遠慕

PH:2~13

保存:RT

干顆粒直徑: 40~120 μm

床體積毫升/克干分子篩:12~15ml/g

分子量分級范圍:A.肽及球形蛋白質:3000~80000;B葡聚糖(線性分子):1000~50000

性狀:白色珠粒或粉末,屬親水性凝膠;性穩定,不溶于水、弱酸和堿溶液,遇強酸能使糖甘鍵分解。

適用范圍:限于科研實驗,不作臨床。

葡聚糖凝膠G-75說明書

葡聚糖凝膠G-75說明書

葡聚糖凝膠G-75化學性質

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹; G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同;葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度;超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜;粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速;另外,粗級也可用于批量工藝。

化學穩定性:

葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解);它在水,鹽溶液,有機溶劑,堿和弱酸性溶液中都是穩定的,在強酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解;長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。

物理穩定性:

葡聚糖疑膠并不熔融,可以在濕態,中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃,30分鐘而不影響它的色譜性質;干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化;葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。

 

葡聚糖凝膠G-75分離技巧:

1、分離時流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達;接餾分時可開全速,節省時間。

2、柱子盡可能長,葡聚糖凝膠柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。

3、餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。

4、洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

5、鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質

6、葡聚糖凝膠對黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻參考。

7、醇替換出來,待用;暫時不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,zui后泡在醇中貯于磨口瓶中備用;如長期不用時,可在以上處理基礎上,減壓抽干,再用少量乙迷洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。

 

葡聚糖凝膠G-75使用方法

1、乙醇浸泡:

在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇,濾干;

2、無鹽水浸泡:

室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹;

3、 鹽酸浸泡:

在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗至中性;

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5: 1 即可;

7、洗脫方法:

可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

8、在位清洗(CIP)

凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

 

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標簽:葡聚糖凝膠G-75葡聚糖凝膠

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