磷酸化熱休克蛋白27抗體測定步驟說明書
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中文名:磷酸化熱休克蛋白27抗體
供應商:上海遠慕
規格:0.1ml/0.2ml
性狀:Lyophilized or Liquid
亞型:IgG
濃度:1mg/1ml
貯存: 貯存于-20℃
用途:用于免疫組化實驗;WB實驗;相應的標記抗體有HRP標記抗體;FITC標記;BIO等。
適用范圍:限于科研實驗,不作臨床。
磷酸化熱休克蛋白27抗體詳細說明
磷酸化熱休克蛋白27抗體測定步驟:
1.抗原包板:15ug/ml 小鼠IgG-pH9.6·CB液 0.1ml/孔;
2.37°C包被60min或4°C過;
3.PBST洗板3次,5min/次;
4.加入倍比稀釋的HRP標記抗體 0.1ml/孔;
5.37°C 30min;
6.PBST洗板5min/次×3;
7.底物液0.1ml/孔 37°C 5-10min;
8.終止液:2N H2SO4 0.05ml/孔;
9.450nm 測定OD值;
10.陽性OD值比對照值大3倍,為判斷效價稀釋度。
磷酸化熱休克蛋白27抗體修復方法:
1,沸水浴修復,將盛有修復液和玻片的燒杯置于沸水浴環境,保持外部沸騰狀態15min,自然冷卻至室溫。
2,微波修復,將盛有修復液和玻片的燒杯置于微波爐中,高火5min,?;?min,中火5min,自然冷卻至室溫。
磷酸化熱休克蛋白27抗體鑒定方式:
1、抗體的效價鑒定:不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管 凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散 試驗來鑒定。
2、抗體的特異性鑒定:抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以 交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在ic50時的濃度,并按 公式計算交叉反應率。
如果所用抗原濃度ic50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質的ic50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質的交叉反應率近似為0,即該血清的特異性較好。
3、親和力:是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助于維持抗原抗 體復合物穩定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數k表示,k的單位是l/mol??贵w親和力的 測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
磷酸化熱休克蛋白27抗體訂購說明:
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標簽:磷酸化熱休克蛋白27抗體