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ELISA試劑盒實驗中關鍵的步驟
點擊次數:676 更新時間:2017-12-26
   ELISA試劑盒實驗中關鍵的步驟
  1.重要的洗滌:
  如果洗滌不充分,會造成一系列的差異和高背景zui后導致實驗結果偏差大。如果未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。條件允許的情況下,適當增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。
  2.關鍵的封閉:
  封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高,懷疑封閉不充分,那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
  目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
  3.抗體濃度須優化:
  如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
  第四、檢測試劑要適量:
  一定不可以使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液。
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