α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD)檢測(cè)試劑盒(速率微板法)說明書
中文名:α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD)檢測(cè)試劑盒(速率微板法)
供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格:100T
分類:酶類檢測(cè)
保存:—20℃,避光,12個(gè)月
用途:又稱連續(xù)監(jiān)測(cè)法,定量檢測(cè)血清、血漿、組織等樣品中的α-羥丁酸脫氫酶活性
適用范圍:限于科研,實(shí)驗(yàn),不作臨床。
α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD)檢測(cè)試劑盒(速率微板法)檢測(cè)原理:
α-羥丁酸脫氫酶催化α-酮丁酸還原成α-羥丁酸,同時(shí)使NADH氧化成NAD+。酶標(biāo)儀檢測(cè)340nm處吸光度,監(jiān)測(cè)吸光度下降速率,進(jìn)而計(jì)算α-羥丁酸脫氫酶的活性。
α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD)檢測(cè)試劑盒(速率微板法)操作步驟:
1, 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)。
2,加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3,溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4,配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。
5,洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6,加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7,顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘。
8,終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
9,測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD)檢測(cè)試劑盒(速率微板法)注意事項(xiàng):
1,底物請(qǐng)避光保存。
2,嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
3,所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
4,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
5,為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。