質(zhì)粒中量提取試劑盒,Plasmid Midi Kit(25)使用說明書
上海遠(yuǎn)慕生物專業(yè)供應(yīng)美國Omega旗下產(chǎn)品:DNA、RNA回收純化相關(guān)溶液,基因組DNA相關(guān)溶液,RNA相關(guān)溶液,質(zhì)粒相關(guān)溶液,酸洗玻璃珠,破壁酶Lyticase,植物組織直接PCR試劑盒,動(dòng)物組織直接PCR試劑盒,石蠟組織(FFPE)直接PCR試劑盒,磁珠mRNA組織直接抽提試劑盒,質(zhì)粒大量提取試劑盒,其他系列等,本司代理多款進(jìn)口品牌及國產(chǎn)品牌供您選擇,產(chǎn)品包含:ELISA試劑盒,動(dòng)物血清,質(zhì)粒載體,標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品,培養(yǎng)基,抗體,化學(xué)試劑,生化試劑,染色液,實(shí)驗(yàn)耗材,其他實(shí)驗(yàn)試劑等,品種齊全,型號(hào)廣,價(jià)格實(shí)惠,咨詢訂購!
名稱:質(zhì)粒中量提取試劑盒
品牌:Omega
供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕
英文名/型號(hào):Plasmid Midi Kit(2)
英文名/型號(hào):Plasmid Midi Kit(10)
英文名/型號(hào):Plasmid Midi Kit(25)
英文名/型號(hào):Plasmid Midi Kit(100)
用途:從15-50ml細(xì)菌培養(yǎng)液中純化200-250ug高純度的質(zhì)粒DNA
Plasmid Midi Kit(25)特性與優(yōu)點(diǎn):
無內(nèi)毒素-內(nèi)毒素含量低于0.1EU/µg
方便-菌裂解液中去除雜質(zhì)無需離心操作
安全-無酚lvfang抽提
可靠-操作簡單
Plasmid Midi Kit(25)操作步驟:
提示:將RNase A全部加入溶液P1中,混勻,使用后置于2-8℃保存。
1.取過夜培養(yǎng)菌40-60ml(zui大不超過90 ml)菌液,裝入50ml離心管中,4,500~6,000 x g于4℃離心5 min沉淀菌體(也可12,000 x g離心2分鐘),*棄除上清。
2.加入2.5 ml 溶液P1,充分混懸震蕩菌體沉淀,使其*分散開,至無絮塊存在。室溫放置3~5 min。 如果有未*混勻的菌塊,會(huì)影響裂解,導(dǎo)致提取量和純度偏低。
3.加入2.5 ml 溶液P2,輕輕顛倒離心管6~8次,室溫放置5 min,使細(xì)菌*裂解,溶液透明。 溫和地混合,不要?jiǎng)×艺鹗?,以免基因組DNA剪切斷裂!所用時(shí)不應(yīng)超過5分鐘!以免質(zhì)粒受到破壞。此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠,如果菌體少,很快清亮粘稠后就可以做下一步,不是一定要準(zhǔn)確的5分鐘。如果未變得清亮,可能由于菌體過多,裂解不*,應(yīng)減少菌體量。
4.加2.5 ml溶液PⅢ,立即顛倒離心管6~8次,充分混勻,至白色絮狀物產(chǎn)生。上述裂解液于4℃ 12,000~16,000 x g離心10~15 min,小心吸出上清,移入新的50 ml離心管中。 加入溶液PⅢ后應(yīng)該立即混勻,以免產(chǎn)生SDS的局部沉淀。 注意: 使用異丙醇沉淀,蛋白雜質(zhì)和鹽離子共沉淀較少,可能看不到明顯的較大團(tuán)塊沉淀,但是質(zhì)粒還是可以*沉淀下來,不影響實(shí)際的質(zhì)粒產(chǎn)量。如果你習(xí)慣看見較大的沉淀團(tuán)塊操作,可以選擇2倍體積的無水乙醇沉淀。
5.加入5 ml 異丙醇,顛倒離心管,充分混勻。
6.于4℃ 12,000~16,000 x g離心10 min,小心棄去上清,倒置于吸水紙上輕輕瀝干殘余液體,加入3-5ml 70%乙醇漂洗一遍,zui高速離心5分鐘,棄上清,晾干沉淀。 DNA沉淀如果干燥過頭,DNA將無法*溶解,但是如果乙醇沒有晾干揮發(fā)干凈,殘留太多,也會(huì)造成DNA無法*溶解。 注意:異丙醇離心沉淀后,質(zhì)粒純度很高吸附在管底和側(cè)壁可能看不見沉淀,但是不影響產(chǎn)量,后續(xù)步驟仔細(xì)吹打管底和沉淀所在的側(cè)壁涮洗溶解質(zhì)粒。
7.加入0.7 ml 溶液P1*溶解沉淀團(tuán)塊,注意附著在管底和側(cè)壁上的質(zhì)粒沉淀雖然可能看不見,也要吹打管底和沉淀所在的側(cè)壁涮洗下來(大質(zhì)??捎脤捒谖茌p輕吹打輔助溶解)。然后將質(zhì)粒溶液轉(zhuǎn)入1個(gè)新的1.5 ml離心管中。 可選步驟(一般不需要):如果菌株RNA豐富有微量RNA殘留,可在此步驟后將質(zhì)粒溶液 60℃孵育15 min消化RNA。
8.加入55μl雜質(zhì)清除液A,顛倒充分混勻后加入約0.1體積(約80μl)冰預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑,顛倒旋轉(zhuǎn)7-10次(30秒左右)充分混勻,冰浴或者冰上放置>=5分鐘,中間偶爾顛倒混勻幾次。 內(nèi)毒素清除劑加入上清后,上清會(huì)變得渾濁,但是冰浴后應(yīng)恢復(fù)清亮。 注意:如果不需要去內(nèi)毒素用于轉(zhuǎn)染,可在此步驟只加入55μl雜質(zhì)清除液A,充分混勻后冰上放置5分鐘,離心后小心取上清轉(zhuǎn)入一個(gè)新管,直接接步驟11。
9.42℃水浴,溶液又會(huì)變?yōu)闇啙?,顛倒混勻?2℃溫育5分鐘。
10.室溫14,000 x g離心5 min分相(溫度低時(shí),內(nèi)毒素清除劑無法分相,因此必須 至少20℃以上室溫離心或者保證冬季轉(zhuǎn)頭溫度20℃以上)。上層水相含DNA,下層藍(lán)色油狀相含內(nèi)毒素和其它雜質(zhì)。將含DNA的上層水相轉(zhuǎn)移到新管(注意不要吸到藍(lán)色油狀層,里面含內(nèi)毒素等雜質(zhì)),棄油狀層。溶液必須分為上下兩相,否則應(yīng)重復(fù)步驟9-10。
11.將上一步所得上層水相中加入等體積雜質(zhì)清除液B(約750μl),輕柔混勻,4℃ 14,000 x g離心10 min,棄上清(注意不要丟失DNA),輕輕加入1 ml 70%乙醇洗滌,離心棄上清,共兩次,室溫倒置晾干5~10 min使乙醇*揮發(fā)。
12.加適量TE或者純水(50~100μl)溶解沉淀(可在37℃水浴中振蕩以輔助溶解)。 要注意很多質(zhì)粒DNA可能附著在離心管側(cè)壁上,即使看不見,也應(yīng)該充分吹打側(cè)壁溶解回收質(zhì)粒DNA。 zui后沉淀可以根據(jù)需要選擇任意小體積溶解,這樣可以得到很高濃度的轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒DNA(高達(dá)5-10μg/μl)。如果有需要,客戶也可以選擇更大體積溶解。
溫馨提示:以上相關(guān)說明請以產(chǎn)品實(shí)際說明書為準(zhǔn)!
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標(biāo)簽:質(zhì)粒中量提取試劑盒 Plasmid Midi Kit(25) 中量質(zhì)粒提取試劑盒 質(zhì)粒提取試劑盒