ELISA檢測(cè)試劑盒之ELISA實(shí)驗(yàn)誤差如何操作?
點(diǎn)擊次數(shù):822 更新時(shí)間:2017-08-16
ELISA檢測(cè)試劑盒之ELISA實(shí)驗(yàn)誤差如何操作?
對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn),科研人員zui怕的就是有誤差,我們能做的就是在可控的范圍內(nèi),減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差,才是實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)。在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中,誤差有誤差,一個(gè)個(gè)小小的誤差導(dǎo)致zui終實(shí)驗(yàn)存在極大的數(shù)據(jù)差距,那么如何縮小實(shí)驗(yàn)誤差?下面隨著小編一起來(lái)看看需要注意的:
ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否關(guān)鍵在于減少實(shí)驗(yàn)誤差
1、科研工作者應(yīng)該具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和操作經(jīng)驗(yàn),對(duì)于實(shí)驗(yàn)儀器、器械都很熟悉,而且具備總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,能夠及時(shí)處理實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的意外。
2、使用校對(duì)過(guò)的微量移液器,排除因?yàn)樵O(shè)置錯(cuò)誤導(dǎo)致的誤差。
3、仔細(xì)閱讀elisa說(shuō)明書(shū),嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)來(lái)操作,不要混用不同批號(hào)的試劑,對(duì)于不能確定的,需要反復(fù)實(shí)驗(yàn)并總結(jié)進(jìn)行改進(jìn)。
4、洗滌*,洗滌不干凈,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性,洗滌液也要新鮮,要現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可以出現(xiàn)假陽(yáng)性。
5、嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間比較長(zhǎng),酶失去活性;反應(yīng)時(shí)間短的話,酶結(jié)合物不能和血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物機(jī)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可以造成假陰性。
6、注意試劑盒的保存期,過(guò)期的試劑盒不能使用。
7、評(píng)估試劑的實(shí)用性,試劑是否穩(wěn)定,準(zhǔn)確率高低很重要,在試劑啟用前,應(yīng)該對(duì)陰、陽(yáng)對(duì)照品反復(fù)對(duì)照實(shí)驗(yàn),判定試劑符合要求后才能使用。
8、嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間短的話,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物量過(guò)少,容易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判定為假陽(yáng)性,這可能和試劑有關(guān)系,加顯色后立即顯色,不可報(bào)陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
9、加樣需要準(zhǔn)確快速,如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過(guò)高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效。