上海遠慕為您講述:樣品蛋白的提取和定量
點擊次數:946 更新時間:2017-07-05
上海遠慕今天為您講述:樣品蛋白的提取和定量
方法一:采取Tris-丙酮法進行蛋白提取,
方法如下:
(1)取0.5ɡ鮮葉放入用液氮預冷的研缽中,加入適量液氮后迅速將其磨成粉末。
(2)加入0.25ɡ水不溶性PVP,加入4倍鮮葉體積即2ml蛋白提取緩沖液 充分研磨。
(3)4℃下45min,后離心(4℃,15000g,15min)
(4)取上清液加入2.5倍即5ml -20℃預冷的丙酮,-20℃下靜置45min,之后同上離心,取沉淀在-20℃下靜置揮去丙酮。
(5)加入1ml上樣液(12.5% ,0.5mol/L Tris-HCL PH6.8),沉淀充分溶解后,同上離心,取上清液即為待測蛋白溶液。
方法二:
取1~2g茶鮮葉加入等量PVPP和少量石英砂,液氮研磨,加入pH 7.4的PBS緩沖液繼續研磨直至勻漿,15000 g、4℃離心15 min,上清液即為粗酶液。
粗酶液放于4℃冰箱中保存備用。蛋白定量采用G-250法(Bradford法)進行。