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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

瓊脂糖凝膠電泳實驗
點擊次數(shù):2122 更新時間:2016-10-11

    瓊脂糖凝膠電泳實驗


   上海遠(yuǎn)慕生物主營產(chǎn)品有ELISA試劑盒、層析色譜填料、標(biāo)準(zhǔn)品、血清、染色液等,如有意向,可與我司銷售。

    注:本公司產(chǎn)品僅供科研使用!


    一、試劑配制
    1.5×TBE緩沖液:450mmol/LTris-硼酸,10mmol/LEDTA,pH值8.0。使用時將上述儲存液稀釋10倍至0.5×TBE緩沖液,可同時作為電泳及制膠用的緩沖液。
上海遠(yuǎn)慕凝膠試劑


    二、制膠
    1.根椐制膠量及凝膠濃度,在加有一定量的電泳緩沖液的三角錐瓶中,加入準(zhǔn)確稱量的瓊脂糖粉(總液體量不宜超過錐瓶的50%容量)。瓊脂糖粉末與0.5×TBEbuffer的比例(w:v)參考表1,常用瓊脂糖濃度為0.7-1%。表1瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的*分辨范圍瓊脂糖濃度*線形DNA分辨范圍

(bp)0.50%1000~300000.7%800~120001%500~100001.20%400~70001.50%200~30002%50~20002%~5%20~1000


    2.在錐瓶的瓶口上蓋上保鮮膜或牛皮紙,并在膜或紙上扎些小孔,然后在微波爐中加熱溶解瓊脂糖。加熱時,當(dāng)溶液沸騰后,請戴上防熱手套,小心搖動錐瓶,使瓊脂糖充分均勻溶解。此操作重復(fù)數(shù)次,直至瓊脂糖*溶解。


    3.使溶液冷卻至50℃-60℃左右,如需要可在此時加入溴化乙錠溶液(終濃度0.5μg/ml)或按照1μL/30mL的比例加入DNAgreen染料,并充分混勻。


    4.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中,然后在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度一般在3~5mm之間。制膠模如下圖所示,小膠倒入25-30mL左右瓊脂糖溶液,大膠則60-70mL左右,若需切膠回收,凝膠可適當(dāng)加厚。


    5.在室溫下使膠凝固,大約30分鐘~1小時。


    三、上樣


    1.取適量樣品與6×上樣緩沖液混勻(如:1μl樣品與5μl6×上樣緩沖液),用微量移液槍小心加入樣品槽中。


    2.上樣量根據(jù)樣品濃度可適當(dāng)調(diào)整,若DNA含量偏低,則可依上述比例增加上樣量,但總體積不可超過樣品槽容量(一般小孔40μl為上限,大孔200μl為上限,具體和制膠膜規(guī)格相關(guān))。


    3.每加完一個樣品要更換槍頭,以防止互相污染,注意上樣時要小心操作,避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。


    四、電泳
    1.加完樣后,合上電泳槽蓋,立即接通電源。控制電壓保持在110V,電流在40mA以上。
    2.當(dāng)條帶移動到距凝膠前沿約2cm時(約40min),停止電泳。
    3.紫外下拍照并觀察

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