遠(yuǎn)慕生物闡述:ELISA試驗(yàn)原理及應(yīng)用
ELISA(enzymelinkedImmunosorbentAssay)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)中,常應(yīng)用ELISA試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)量或者活性狀態(tài),檢測(cè)化學(xué)修飾(磷酸化與去磷酸化)。
結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
elisa可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);
(3)酶反應(yīng)的底物。