經(jīng)驗(yàn)講談ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)問題分析方案
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*、陰性樣本的吸光度值低于陽(yáng)性吸光度值原因:
可能原因是出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象或酶標(biāo)板孔中的試劑未充分的混合。解決的辦法是注意操作的方法,注意洗滌時(shí)的方法、加完試劑后可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30s,混勻液體。
第二、吸光度值偏高是怎么回事;
可能引起的原因有孵育的溫度過高、反應(yīng)的時(shí)間過長(zhǎng)。相對(duì)應(yīng)的解決辦法是調(diào)整孵育環(huán)境的溫度,如無(wú)法調(diào)整室內(nèi)的溫度,請(qǐng)將顯色時(shí)間適當(dāng)?shù)目s短、控制反應(yīng)時(shí)間。
第三、樣品的稀釋:
樣品稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性。
ELISA反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此,國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴(yán)格按使用說(shuō)明書操作,如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋,個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確,檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題。
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